微生物记数***,微生物记数法

交换机 2024-09-20 1 0

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微生物的直接计数方法？
微生物计数法？
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微生物的直接计数 方法？

测定微生物数量的方法

(1)直接计数法：常用的是显微镜直接计数。

（图片来源网络，侵删）

(2)间接计数法：常用的是稀释涂布平板计数法。

利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（ 0．1mm2），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。

（图片来源网络，侵删）

测定微生物计数的方法有很多,主要有以下几种：

1. 血细胞计数法

2. 将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上,在显微镜下计算4~5个中格的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再以此为依据,估算总菌数.

（图片来源网络，侵删）

3. ①此法的缺点是不能区分死菌和活菌.

4. ②对压在小方格界线上的细菌,应当取平均值计数.

5. ③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化

6. 2.稀释涂布平板法

7. 原理：每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落.培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌.

8. ①这一方法常用来统计样品中活菌的数目

9. ②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是当两个活多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落.因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示.

微生物计数法？

微生物计数的方法主要有两大类，一类是非培养的原位计数法，一类是培养后的计数法。

非培养的原位计数法，将适当稀释的菌悬液滴在细胞计数板上(2微升，需要体积准确)，在显微镜下，通过显微镜观察计数板每个小格子里的细胞数量，统计出计数板上所有的细胞量。再根据稀释倍数和液滴的体积计算出原样品中1毫升中含有多少细菌细胞。

细菌细胞培养后计数方法有两种，一种是固体培养法(CFU)，另一种是液体培养法(MPN)。

CFU法是梯度稀释培养法，将样品进行10倍的梯度稀释，通常环境样品稀释至10的-8次幂，细胞比较好的分散度。两所有的稀释样品取100微升均匀涂布在预制好的固体培养基平板上(2-3个平行)，然后置于适当的温度(一般是25-30°)培养过夜，观察所有的平板菌落生长情况，分散均匀的基本就是一个菌落就是一个细胞形成的，计数菌落就是样品中的细胞数量，计数平板选择生长数量在100个菌落左右的平板比较准确。将平板菌落数×稀释倍数就得到原环境细胞数量。

MPN是细胞绝迹稀释法，将样品进行10倍的梯度稀释，稀释程度适当增加3-5个梯度，即一般稀释至10的-10至-12次幂。将每个稀释液分别取100微升转接入3个平行的液体培养基(3-5毫升)中，置于适当温度(一般25-30°)，过夜培养。观察所有的稀释培养试管，记录绝迹生长最后三个稀释度的情况，查MPN统计表，将查表数值×稀释梯度，获得原样品细菌细胞数量。