大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于微生物室标本接收的问题,于是小编就整理了2个相关介绍微生物室标本接收的解答,让我们一起看看吧。
微生物取样后为什么要在4小时内送检?
因为取样后微生物离开了本来的生活环境,要保持微生物的活性就必须在适宜的环境下进行培养,不然生物活性消失以后检验就不准确了,四个小时是维持生物活性的一个时间段,条件允许的话当然是尽快送检比较好。
痰液标本做DNA提取的处理方法有哪些?
谢谢邀请!过去是用蛋白酶k消化,然后用氯仿抽提,用乙醇沉淀洗涤,如果警用还要注意分离出口腔上皮细胞,用于对照犯嫌疑人。现代国际科技先进多了,只用波反射,就能在极短时间内区分出DNA。
本人不是很清楚
我觉得可以参考:张军力, 托娅, 王育民. 不同的液化方法对痰液DNA提取效果比较[J]. 检验医学, 2009, 24(6):456-458
4种不同的液化方法 方法1:500 μ L痰液加入5 mL 1 mol/L氢氧化钠, 振摇液化30 min后, 14 000 r/min(离心半径为6.8 cm)离心5 min, 沉淀用1.5 mL去离子水洗, 12 000 r/min(离心半径为6.8 cm)离心5 min, 留沉淀待用;
方法2:痰液中加入4倍体积的1 mol/L 氢氧化钠, 混合液化30 min, 80 ℃消化30 min, 取1.5 mL于离心管, 12 000 r/min(离心半径为6.8 cm)离心5 min, 沉淀用三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)和乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲液洗3次, 12 000 r/min(离心半径为6.8 cm)离心5 min, 取沉淀待用;
方法3:Saccomanno液(每50毫升固定液中含50%乙醇48 mL, 2%聚乙二醇1 mL、0.3%利福平1 mL)、 二硫苏糖醇(DTT)液(0.1 g DTT、0.78 g氯化钠、0.02 g氯化钾、0.112 g磷酸二氢钠、0.02 g磷酸二氢钾, 加水至2 L, 使DTT浓度为0.005%[4])等体积混合, 1~2倍体积加入到痰液中, 振摇液化30 min;
方法4:痰液用1~2倍体积液化剂(0.5%N-乙酸-L半胱氨酸, 1.45%枸橼酸钠, 2%氢氧化钠)振摇液化30 min。
痰液中DNA提取***用经典的酚-氯仿抽提的方法。加等体积氯仿:异戊醇(24:1)混匀, 8 000 r/min(离心半径为6.8 cm)离心10 min, 转移上层水相, 加2倍体积无水乙醇和1/10体积3 mol/L醋酸钠, 混匀, -20 ℃ 60 min后, 12 000 r/min(离心半径为6.8 cm)离心15 min, 以70%乙醇洗涤1~2次, 室温稍干燥后加入100 μ L Tris-HCl和EDTA缓冲液, 溶解DNA。
吸光度(A)检测 应用Beckman Coulter DU800型核酸蛋白分析仪检测波长为260和280 nm处的A。
该文认为方法3:Saccomanno法和DTT法的联合应用, 对痰液的固定液化效果较好, 有利于痰液DNA的提取
1.首先需要一个专用的标本盒收集痰液。
2.咳出痰液,必须从肺的深部咳出,而不是唾液。
3.从痰液中分离微生物,找出致病菌或是病毒,必要时可以做培养。
4.从病原微生物中分离提取DNA碱基序列。
5.与标准序列进行比对。
6.得出结论。
7.发布。
到此,以上就是小编对于微生物室标本接收的问题就介绍到这了,希望介绍关于微生物室标本接收的2点解答对大家有用。